Вградена обработка на данни с ултравиолетовия детектор DWD-1 (високопроизводителен двоен лъч с двойна дължина на вълната)

Диапазон на дължините на вълната: 254 nm, 280 nm (едновременно откриване), както и две дължини на вълната между 254 nm, 280 nm-400 nm спектърни линии, които се избират едновременно.

Характеристики на инструмента DWD-1

Протеин 280nm/254nm двойна дължина на вълната:

Протеиновите молекули съдържат двойно свързани ароматични аминокиселини като тирозин и трин. Те имат свойството на абсорбиране на ултравиолетова светлина, нейният пик на абсорбция е на 280nm дължина на вълната, и стойността на плътността на оптичната абсорбция в тази дължина на вълната е пропорционална на нейната концентрация, така че може да се използва като основа за качествено и количествено определяне на протеините, затова методът на ултравиолетова абсорбция на 280nm обикновено се използва за непрекъснат мониторинг на концентрацията на протеини в системата за парализиране. Но тъй като съдържанието на тирозин и тризин в различни протеини е различно, за да се определи точното количество, трябва да се сравни чистият протеин като стандарт или да се знае коэффициентът на отслабване като референтна точка. Освен това, много не-протеинови вещества също имат определен абсорбционен капацитет при дължина на вълната 280 nm, което може да доведе до смущения. Те са особено по-сериозни от нуклеиновите киселини (пурините и пиримидините). Абсорбцията е 10 пъти по-силна (на грам) от протеините при 280 nm, но нуклеиновата киселина е по-силна при 254 nm, като нейният пик на абсорбция е близо до 254 nm. Коефициентът на нуклеанната киселина при 254 nm е два пъти по-голям от този при 280 nm.

Протеините, за разлика от това, абсорбцията на 280 nm е по-голяма от абсорбцията на 254 nm.

Обикновено：

Съотношение на абсорбция на светлина на чист протеин: A280/A254" 1,8

Съотношение на абсорбция на светлина на чиста нуклеарна киселина: A280/A254

Следователно, когато нуклеанната киселина съществува едновременно в протеиновия разтвор (което се случва в повечето биологични системи), OD254nm трябва да бъде измерена едновременно с OD280nm. След това, въз основа на съотношението между абсорбцията на двете дължини на вълната, истинското съдържание на протеина се изчислява чрез експериментална формула, за да се елиминира ефектът на нуклеанната киселина.

Протеинова концентрация: 1,45×A280 – 0,74×A254 (mg/ml)

Тази експериментална формула е създадена с помощта на данни, определени от редица известни съотношения на различни концентрации на смес от протеини (дрожди енололази) и нуклеинови киселини (дрожди нуклеинови киселини).